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本制品是一种使用DNA绿色荧光染料YO-PRO-1在死细胞或经过通透处理的细胞中染色细胞核的染色液。本染色液染色后可以用于荧光显微镜、流式细胞仪、荧光酶标仪等荧光检测。

YO-PRO-1，又名恶唑黄(Oxazole yellow)，简称YP1，是一种对正常动物细胞膜没有通透性而对于凋亡与坏死细胞的细胞膜有通透性的DNA绿色荧光染料，常用于细胞凋亡与坏死的检测。YO-PRO-1是一种非细胞膜穿透性的并对DNA具有高亲和力的羰花青单体绿色荧光染料，在没有与DNA结合的时候基本上没有荧光，而与DNA结合后可以发出明亮的绿色荧光。在细胞凋亡发生时，细胞膜通透性发生改变，此时YO-PRO-1可以进入细胞内与DNA结合，发出明亮的绿色荧光，因此YP1常和碘化丙啶(PI)配合用于分析和鉴定凋亡和坏死细胞，也可以直接使用细胞凋亡与坏死检测试剂盒(YO-PRO-1/PI，货号：YTC0088)。

YO-PRO-1细胞核染色液(含RNase)染色DNA后的最大激发光波长在491nm，最大发射光波长为509nm。由于YO-PRO-1荧光与其它荧光有很好的区分，所以非常适合用于多重荧光抗体标记时对细胞核进行染色。YO-PRO-1细胞核染色液(含RNase)染色DNA后的激发光和发射光光谱参考图1。

图1．YO-PRO-1细胞核染色液(含RNase)染色DNA后的激发光和发射光光谱。


YO-PRO-1细胞核染色液(含RNase)为即用型染色液，无须稀释即可直接加入样品中进行凋亡与坏死细胞或经过通透处理的细胞的细胞核的染色，十分便捷。YO-PRO-1细胞核染色液(含RNase)用于细胞核染色的效果参考图2。RNase的存在可以充分消化细胞内的RNA，使染色效果更佳。

图2．YO-PRO-1细胞核染色液(含RNase)对NRK-52E细胞的细胞核的染色效果。YO-PRO-1细胞核染色液(含RNase)染色的NRK-52E细胞的细胞核呈绿色荧光(图B)，微管红色荧光探针(Tubulin-Tracker Red，货号：YT179)染色的NRK-52E细胞的微管结构见图C，绿色荧光和红色荧光的叠加(merge)的效果见图D。
注：NRK-52E细胞经免疫染色固定液(货号：YT086)固定后使用强力免疫染色通透液(货号：YT997)通透。实验检测效果因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中效果仅供参考。

组分	10mL	50mL
YO-PRO-1细胞核染色液(含RNase)	10mL	50mL
说明书	1份	1份

保存：-20℃，避光，有效期1年。


本染色液的10mL和50mL包装用于6孔板每孔检测体系为500μL时分别可以检测20次和100次；用于96孔板每孔检测体系为100μL时可以分别可以检测100次和500次。实际检测次数会因为检测体系的大小而有所不同。

• 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
  
• 实验中所用到的免疫染色固定液(货号：YT086)、强力免疫染色通透液(货号：YT997)可以向百奥莱博订购。
  
• 染色液中含有RNase酶，如果使用比较频繁，可置于4℃保存，6个月有效，尽可能减少反复冻融。

固定后细胞或切片的染色：

• 使用多聚甲醛固定液(4%，货号：YTC0099)或免疫染色固定液(货号：YT086)对细胞进行固定，室温固定10～15min。
  
• 吸除固定液，用PBS溶液(货号：YTB1103)或免疫染色洗涤液(货号：YT089)洗涤细胞2～3遍。
  
• 选做：使用免疫染色通透液(P0096)或配制在PBS中的0.1%曲拉通X-100(货号：YTB1104)进行通透，室温5min。然后用PBS或免疫染色洗涤液(货号：YT089)洗涤细胞2～3遍。如果用于染色凋亡或坏死细胞，则无需进行通透处理。
  
• 选做：按照免疫染色的方法进行抗体的孵育或用其它染料进行染色。
  
• 加入适当体积的YO-PRO-1细胞核染色液(含RNase)，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞或样品。
  
• 37℃避光孵育5～20min，以5min为初始孵育时间，后续可以根据实际染色效果对染色时间进行适当调整和优化，以得到更加理想的染色效果。
  
• 吸除YO-PRO-1细胞核染色液，用PBS溶液(货号：YTB1103)或免疫染色洗涤液(货号：YT089)洗涤2～3次，随后即可在荧光显微镜下观察或其它荧光检测系统检测。如果之前未经过通透处理，并且希望区分凋亡和坏死细胞，可以使用碘化丙啶(PI)进行复染，PI染色阳性的为坏死细胞，YP1染色阳性的为凋亡与坏死细胞。

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